Nguyên nhân chính thường do đột biến các gen mã hóa cho các enzyme tham gia trình β oxi hóa acid béo, dẫn tới thiếu hụt những enzyme này. Kỹ thuật sinh học phân tử giải trình tự gen Sanger (Sanger sequencing) hiện đã được ứng dụng để chẩn đoán xác định đột biến gen CPT2/SLC25A20 do tính chính xác và đặc hiệu cao hơn các phương pháp xét nghiệm hóa sinh truyền thống. Trong giải trình tự gen Sanger, giai đoạn khuếch đại đoạn gen đặc hiệu bằng PCR có yêu cầu khắt khe về nhiệt độ gắn mồi, nồng độ mồi hay số chu kỳ nhiệt để đảm bảo chất lượng các đoạn gen thu được sau phản ứng. Nghiên cứu này tập trung vào tối ưu hóa bộ mồi đặc hiệu trong xác định đột biết gen CPT2 và SLC25A20. Kết quả cho thấy nhiệt độ gắn mồi từ 53°C – 57°C và nồng độ mồi trong khoảng 0,5 μmol/L – 1,0 μmol/L là tối ưu cho đa số các exon trong phân tích hai gen trên. Số chu kỳ nhiệt tối ưu là 40 chu kỳ với DNA khuôn được tách từ máu toàn phần có nồng độ 78,3 ng/μL.